ウルトラ - 株式会社コーストワイズ・ベンチャーズ・グループ

Scientific Reports volume 13、記事番号: 8967 (2023) この記事を引用

312 アクセス

5 オルトメトリック

メトリクスの詳細

歯石は、過去の人々の食生活や口腔マイクロバイオームを再構築するための貴重な資源です。 2020年、アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵とその妻マリア・ダヴィズの遺体が発掘され、死因についての新たな洞察が得られた。この研究は、非ターゲットメタボロミクスによって貴族夫妻の歯石メタボロームを調査することを目的としました。粉砕されたサンプルは水とギ酸の混合物中で脱灰され、メタノール/アセトニトリルを使用して抽出され、逆相分離とそれに続くエレクトロスプレーイオン化を使用する高分解能質量分析計と組み合わせた超高速液体クロマトグラフィー (UHPLC-HRMS) によって分析されました。プラスおよびマイナスイオンモードでのフルスキャン。 Waters Synapt-G2-Si High-Definition ハイブリッド四重極飛行時間型質量分析計を使用しました。次に、MSE 取得モードを使用して重要な特徴を特定し、同じ実行内の正確な質量プリカーサーおよびフラグメントイオンに関する情報を記録しました。このアプローチと、データの前処理および多変量統計解析を組み合わせることで、調査対象のサンプルを区別できる化合物の同定が可能になりました。 200 を超える代謝産物が同定され、最も多いクラスは脂肪酸、アルコール、アルデヒド、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、セラミド、ホスファチジルセリンでした。食物、細菌、真菌に由来する代謝物も測定され、夫婦の習慣や口腔の健康状態に関する情報が得られました。

歯石は石灰化した微生物のプラークであり、歯の表面に蓄積します1。このミネラルは溝液から沈着しますが、最終的には唾液カルシウム塩の沈殿によって得られるため、唾液腺管に最も近い部位では結石の濃度が高くなります2。歯石は主にヒドロキシアパタイト、フッ素アパタイト、リン酸八カルシウム、ウィトロック石 3 などの無機成分で構成されており、考古学的サンプルによく保存されており、宿主である口腔微生物叢に関連する生体分子 (DNA、タンパク質、脂質など) を埋め込むことができます。および外因性起源の微小デブリ4、5、6、7。したがって、過去 20 年間、歯石は過去の人々の健康状態、ライフスタイル、食生活を調査するための重要な情報源となってきました。光学顕微鏡8、走査型電子顕微鏡、さらにエネルギー分散型X線分光法9,10、熱分解-ガスクロマトグラフィー-質量分析11、およびプロテオミクス、ゲノミクス、メタボロミクスを含むマルチオミクス技術12,13は、体内に閉じ込められた外因性デブリを特徴付ける貴重な技術であることが証明された。歯石、過去に住んでいた個人の習慣や健康に関する情報を提供します。質量分析ベースのオミックス戦略は、調査されたサンプルの包括的なフィンガープリンティングを提供できるため、その感度、高スループット、識別力のおかげで特に有望です。これらの技術の最も重要な利点の 1 つは、その非標的性に依存しており、これにより大量の生体分子に関する情報が提供され、バイオマーカーの同定が可能になります。

メタボロミクスは、バイオインフォマティクスとコンピューターによるアプローチの使用と組み合わせることで、メタボロームの理解と生体サンプル中に存在する代謝産物の同定において重要な役割を果たします 14、15、16。ガスクロマトグラフィーと液体クロマトグラフィー (GC-HRMS、GCxGC-HRMS、LC-HRMS) および核磁気共鳴 (NMR) の両方と組み合わせた高分解能質量分析 (HRMS) など、さまざまな分析プラットフォームを適用して、次のことを包括的にカバーできます。メタボローム。 NMR と比較して特異性、感度、大規模スペクトルデータベースの利用可能性が向上しているため、HRMS はさまざまな生体液、組織、その他の生体サンプルのメタボロミクスプロファイリングに広く適用されています 17、18、19。特に、直交 UHPLC 分離と HRMS をオンラインで組み合わせた分析戦略は、代謝物の対象範囲を拡大するための最良のツールとなります 20。これは、UHPLC が最も効率的な分離技術の 1 つにランクされ 21、HRMS と組み合わせることで広範囲の代謝物の同定が可能になるため 22 です。

最近、Velsko と共著者らは、標的および非標的の MS ベースのアプローチを使用して、現代と古代の両方の標本における歯石のメタボロームを調査しました23。特に、高分解能タンデム質量分析計と組み合わせた UHPLC (UHPLC-HRMS/MS) と GC-HRMS の両方を使用することで、いくつかの生体異物化合物とともに、主に脂質やアミノ酸など、さまざまな化学クラスに属する代謝産物の同定が可能になりました。マイクロバイオームの活動、代謝プロセス、分解パターンに関する洞察を提供します。

本研究では、ウォーターズのハイブリッド四重極飛行時間型 Synapt-G2-Si 高精細 (HD)MS QTOF 質量分析計を使用した UHPLC-HRMS を適用して、アレッサンドロファルネーゼ公爵とその妻マリアの歯石のメタボロームを調査しました。ダヴィズは、16 世紀にパルマ公国とピアチェンツァを統治しました。アレッサンドロファルネーゼ (1545 ～ 1592 年) は、スペイン王フェリペ 2 世の宮廷の主要メンバーであり、16 世紀で最も影響力のある軍事指導者および政治指導者の一人であり、特にフランドル地方で 15 年間総督を務め、数多くの勝利を追求しました。彼の成功によって引き起こされた羨望の念は、彼の死が中毒によって引き起こされたのではないかという疑惑につながりました。この疑念を払拭するために、2020年にアレッサンドロ・ファルネーゼとその妻の遺体がパルマ（イタリア）のサンタ・マリア・デッラ・ステッカータ大聖堂の地下室から発掘された。遺骨が入ったリードケースを開けた後、歯は形態学的分析にかけられた。アレッサンドロ・ファルネーゼの歯列の主な特徴は重度の磨耗でしたが、マリア・ダヴィズの歯は虫歯と歯周病の存在が特徴でした24。これらの発見は、ファルネーゼ公爵が大人になってからの人生のほとんどをヨーロッパ中の戦場で過ごし、妻がパルマ市でポルトガルの宮廷の習慣を維持しているという貴族夫婦の異なるライフスタイルに関連している可能性があります。これに関連して、私たちは、アレッサンドロ・ファルネーゼの死因について新たな洞察を得るという最終目的で、公爵とその妻の歯石のメタボロミクスプロファイルの違いを調査するために、スキャンMSEモードで動作するUHPLC-HRMSの機能をテストしました。貴族夫妻の習慣、健康状態、食事についても。

HRMS 分析は、貴族夫妻の歯石に存在する代謝産物を確実に特定するために適用されました。 Waters Synapt G2-Si HD 質量分析計の複雑なマトリックスプロファイリングの機能は、MSE モードで動作することによって活用されました。低エネルギーと高エネルギーの両方のプロファイルを交互にスキャンして取得することにより、プリカーサーイオンとフラグメントイオンの両方に関する情報が 1 回で得られます。他のデータに依存しない分析手法よりも優れたデューティサイクルで実行されます。

利用可能なサンプルの量が少ないため、PI モードと NI モードの両方で操作することにより、最新の歯石サンプルを使用して、抽出と分析の両方に最適な実験条件を事前に評価しました。抽出手順における水相と有機相の比率と注入量の両方の影響を調査しました。タンパク質の沈殿を誘導するために 1:3 の比率を使用し、抽出された代謝産物の高希釈を避け、8 µL を注入しました。測定を実行するために適切な信号強度を取得します (図 1)。選択されたクロマトグラフィーピークの面積に関しても良好な再現性が得られ、相対標準偏差は PI モードおよび NI モードでそれぞれ常に 5% および 7% 未満でした。

PI モードでの歯石サンプルの UHPLC-HRMS クロマトグラム: 上) Maria D'Aviz および下) Duke Alessandro Farnese。カラム: Atlantis Premier BEH C18 AX 1.7 μm (2.1 × 100 mm); 移動相: (A) 水 + 0.1% (v/v) ギ酸、および (B) アセトニトリル + 0.1% (v/v) ギ酸。注入量: 8 μL。

HRMS によって生成される多数の特徴は、非ターゲットメタボロミクスの最も困難な側面の 1 つです。この文脈では、測定された正確なデータに基づいて、その後の識別のために重要な m/z 値を選択するために、フィルタリングとデータ削減戦略の両方を適用する必要があります。プリカーサーイオンとフラグメントイオンの両方の質量。

アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵の歯石サンプルからは、PI モードと NI モードでそれぞれ合計 5918 個と 5689 個の特徴が抽出され、妻マリアダヴィズの標本では 5525 個と 4728 個の特徴が記録されました。貴族のカップルのサンプル間の区別に関与する特徴を強調するために、グループ内変動が最大 10% であるもののみをその後の処理に使用しました。歯石サンプルのクロマトグラムのノイズレベルを補正するために、抽出ブランクサンプルと比較した最小倍率変化 3 も適用されました。最後に、分析されたデータセット内の実際の効果を検出するための統計的検出力分析の基準値として 0.8 という値が設定されました。上記のフィルターを適用することにより、合計 4859 個の特徴が得られました。

多変量統計分析は、主成分分析 (PCA) を使用して実行され、総分散の 99% が最初の 6 つの PC によって説明されました。図 2 に示すように、アレッサンドロファルネーゼ公爵とその妻の歯石サンプル間の良好な分離は PC1 に沿って達成され、分散全体の 87% 以上を占めました。特徴の数 (4227) のさらなる削減は、PC1 でのローディングプロットの絶対スコアが 0.8 より高い変数のみを識別プロセスに送信することによって達成されました (図 2c)。

PCA: (a) すべての特徴の負荷プロットと (b) スコアプロット。 (c) |loading |> 0.8 を持つ特徴のハイライト。

解明を目的とした先験的な情報が入手できないことを考慮して、正確な質量測定、断片化研究、同位体パターンの分析、ライブラリーマッチング、およびスコアフィットから得られるすべての情報を考慮して化合物の同定が実行されました。

異なるクラスに属する合計 217 の代謝産物が同定されました (表 S1)。スフィンゴ脂質、グリセロリン脂質、および脂肪アシルが最も豊富な化学クラスであり、132 個の化合物を占めています。多数の脂質が存在することは驚くべきことではありません。Velsko らは、現代および古代の歯石のメタボロームに関する以前の研究で、は、高い水溶解度を特徴とする化合物はより容易に分解される可能性があると仮定して、化合物の保存に対する水溶解度の影響を強調しました23。これらの発見に基づくと、脂質の非極性の性質は、長期にわたる保存に有利である可能性があります。さらに、飽和脂肪酸の存在は不飽和脂肪酸のほぼ 2 倍でした。Rogoz et al.12 によれば、この挙動は不飽和化合物の酸化安定性が低下し、分解が容易になったためであると考えられます。 11 個のアミノ酸が検出されました。これらの化合物は時間の経過とともに修飾を受ける可能性もあります。たとえば、チラミンの存在は、発酵または細菌の分解プロセスの結果として生じるチロシンの脱炭酸に関連している可能性があります。チラミンは主にアレッサンドロ・ファルネーゼ公爵の歯石から検出されました。公爵が生涯のほとんどを北ヨーロッパの戦場で過ごしたことを考えると、チラミンの存在は、味付けしたチーズ、乾燥または燻製ニシン、鹿肉、塩漬け肉、発酵飲料などの長寿命食品の摂取に関連している可能性があります25。

公爵の食習慣に起因する可能性のある化合物の中で、ククルビチンとカテキン 5-O-β-d-グルコピラノシド-4'-Me は、ウリ科やルバーブなどの北欧の食卓に並ぶ典型的な食品の摂取に関連している可能性があります26。 27. 対照的に、3-ヒドロキシ-3-メチルオキシインドール、イミダゾール酢酸リボシド、2-(メチルアミノ)-1-フェニルエタノール、およびアルギニルヒドロキシプロリンは、マリア・ダヴィズの食習慣に関連している可能性があります。実際、ヒトメタボロームデータベースと食品によると、データベース (FooDB) によると、これらの化合物はカモ目、ニワトリ、家畜豚の摂取に関する潜在的なバイオマーカーと考えられる可能性があり、マリア・ダヴィズが彼女の有名な料理本に記載されているいくつかのレシピの主材料として家禽を使用したことが知られています28。

スパイスやお茶に一般的に見られる代謝産物のうち、サリチルアルデヒド、DAG(32:4)、カプシアミド、エストラゴール、フェニルピリジン、オイゲノールキノンメチド (EQM) は、マリア・ダヴィズの歯石から主に検出された化合物の一部でした。これらの食品の消費量は驚くべきことではありません。マリア・ダヴィズはポルトガル宮廷の一員であり、この貴族の料理本に頻繁に引用されているスパイスは、ポルトガルの最も重要な植民地であるアゾレス諸島の両方から簡単に輸入できました。ポルトガル帝国とアジア29．

サリチル酸塩に関しては、ハーブ、スパイス、お茶に含まれており 30、サリチル酸塩が豊富な植物の抽出物は、その抗炎症作用と解熱作用により、古くからさまざまな人間の病気の治療に使用されてきたことが知られています 31。

オイゲノールの酸化誘導体である EQM の存在 32,33 は、クローブ、ナツメグ、シナモンなどのスパイスの食事摂取だけでなく 34、オイゲノールをベースとした治療法の抗炎症作用や鎮痛作用も考慮することによって説明できます 35。マリア・ダヴィズに影響を与えた病状である歯痛の治療に使用されました。しかし、EQM の存在は、16 世紀に貴族によって使用されていた防腐処理のためのエッセンスの使用に起因する可能性もあります 36,37。同様に、高貴な夫婦の歯石で観察されたヘスペリジン、ネオヘスペリジン、ナリルチン、ナリンギンカルコン、ジヒドロキシシトラクリドンI、アンフィビンHなどの果物や柑橘類に由来する他の代謝産物の存在は、食物摂取量と摂取量の両方を考慮して説明できる可能性があります。防腐処理の際に使用される香水やエッセンスとしての使用。

口腔マイクロバイオームに関しては、検出された化合物の一部は真菌や細菌の代謝に起因すると考えられます。興味深い結果は、歯周炎の発症に関与する放線菌由来の TMC-34 代謝物の存在に関連しています 38、39、40。この代謝物は主にマリア・ダヴィズの歯石に存在しており、この高貴な女性が虫歯や歯周病に苦しんでいたことが知られている24。

結核菌に関連するグリセロリン脂質 PIM1(37:3)、LPIM4(18:2)、および LPIM4(19:2) などの追加の代謝産物も同定されました 41。彼の死後、アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵の解剖により肺疾患の存在が明らかになり42、2020年の発掘中に得られた結果43によってさらに確認されたため、15世紀から16世紀に蔓延した病気である肺炎が示唆された44,45。

また、出芽酵母のさまざまな代謝産物、つまり C16 フィトスフィンゴシン、C20 フィトスフィンゴシン、MIPC 42:0;O3、MIPC 40:0;O2、PI-Cer(d46:0)46 の存在も強調する必要があり、これらは関連している可能性があります。ワイン製造と醸造に関連するパン焼きと発酵プロセスまで47,48。最後に、ペニパシド B (2-[[N-(2-メトキシ-2-メチルプロピル)-C-メチルカルボイミドイル]アミノ]安息香酸)、バーシキサントン E、アスペルバーシン G または 2,4,6,8 などの他の代謝産物の存在-テトラメチル-3,4-ジヒドロキシデク-8(9)-エノリドは、真菌ペニシリウム・パネウム、アスペルギルス・バーシカラー、ボトリチス・シネレアに由来し、高貴な夫婦の食生活に関連している可能性があります。これらのカビは穀物、油糧種子、ナッツ類を汚染する可能性があるため、主にパンの腐敗に関与しています49,50,51。これらの発見は、ルネッサンス時代に住んでいた上流階級の人々も乾燥した保存状態の悪いパンを消費していたことを示唆しています。

Waters Synapt G2-Si HDMS システムと組み合わせた UHPLC を使用した非ターゲットメタボロミクスは、古代に住んでいた人々の歯石のメタボロームを分析するために首尾よく適用されました。アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵とその妻マリア・ダヴィズの非標的メタボロミクスに関しては、このような複雑なサンプルの成分を効率的に分離する能力と、高分解能 MSE によるデータ独立取得を組み合わせることで、低解像度と低解像度の両方を記録することで調査されたサンプルから得られる情報を最大化することができます。 - 1 回の実行ですべての化合物に関連するエネルギーおよび高衝突エネルギープロファイル。 UHPLC-HRMS とそれに続く主成分分析は、貴族夫妻のサンプルの識別にうまく使用され、200 を超える代謝産物の同定を可能にし、アレッサンドロファルネーゼ公爵とその妻の食習慣と健康状態に関する新たな洞察を提供することができました。メタボロミクス分析の結果から、LC-HRMSとPCAの組み合わせは、古代の標本の歯石を区別し、標本の区別に重要な役割を果たす代謝産物マーカーを同定するための強力な分析技術を提供することを示唆しました。、結核菌に関連する代謝産物の存在は、公爵の死の原因を解明するための貴重な一歩と考えられる一方、食物の摂取に由来する化合物の同定は、貴族夫妻の異なるライフスタイルを裏付けた。

LC-MS グレードの水、アセトニトリル、メタノール、およびギ酸は、Honeywell Burdick & Jackson (米国ノースカロライナ州シャーロット) から購入しました。ロイシンエンケファリン標準は、Waters TOF G2-S サンプルキット-1 (Waters、米国マサチューセッツ州ミルフォード) から入手しました。

歴史的な歯石は、2020年にサンタ・マリア・デッラ・ステッカータ大聖堂（イタリア、パルマ）から発掘された後、アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵とマリア・ダヴィッツ公爵の遺体から収集された。パルマの公証人マルコ・ミケリ博士は、発掘とその後の分析の許可を与えた。歯の身体検査の手順中に、相互汚染を避けるための手順に従って滅菌キュレットを使用して夫婦の歯石が収集され、分析までガラスバイアルに保管されました52,53。 Vasta Emilia Nord 地域の倫理委員会に提出される症例特定に関するガイドライン (https://www.aou.mo.it/ComitatoEticoAVEN) によれば、承認は必要ありませんでした。

抽出条件とクロマトグラフィー条件の両方を評価するために使用される 4 人の健康なドナーからの現代の歯石サンプルは、専門的な口腔衛生セッション中に入手されました。 Vasta Emilia Nord 地域の倫理委員会に提出される症例特定に関するガイドライン (https://www.aou.mo.it/ComitatoEticoAVEN) によれば、承認は必要ありませんでした。サンプル収集はヘルシンキ宣言に従って行われました。ドナーからインフォームドコンセントを得た。

収集後、代謝物を抽出するまで、歴史的および現代の両方の歯石サンプルを -80 °C で凍結しました。サンプルの脱灰は、Velsko et al.23 に従ってわずかに変更を加えて実行されました。サンプル (20 mg) をメノウ乳鉢で穏やかに粉末化し、滅菌ガラスバイアルに入れ、100 μL の 4% (v/v) ギ酸で脱灰しました。 4 °C の水に 18 日間浸漬し、定期的に超音波処理を行います。 ESI- モードで UHPLC-HRMS 分析にかけるサンプルは、15 μL の 5 M 水酸化アンモニウム溶液を加えて中和しました。最後に、アセトニトリル/メタノール 1:1 (v:v) 溶液 300 μL をサンプルに添加し、12,000 xg、4 °C で 30 分間遠心分離しました。次に、上清を収集し、UHPLC-HRMS 分析に供しました。アレッサンドロ・ファルネーゼ公爵夫妻の抽出物を混合したサンプルを品質管理サンプルとして使用した。

クロマトグラフィー分離は、40 °C に温度調節された Atlantis™ Premier BEH™ C18 AX 1.7 μm (2.1 × 100 mm) カラム (Waters) を使用して、バイナリー Acquity UHPLC I-Class システム (Waters) で実行されました。移動相は水 (溶媒 A) とアセトニトリル (溶媒 B) で構成され、両方とも 0.1% (v/v) のギ酸を含みました。流速は０．４ｍＬ／分、注入量は８μＬであった。多段階の直線勾配溶出を以下の条件下で実行しました: 溶媒 B を 1 分間 2% に設定し、続いて 6 分以内に 60% まで、次に 1.5 分で 95% まで直線勾配を設定し、カラムの前に 1.5 分間維持しました。再平衡化 (5 分)。溶出は 10 分以内に実行されました。

HRMS 分析は、エレクトロスプレーイオン化 (ESI) Zspray™ (Waters) を備えた Synapt G2-Si HDMS QTOF 質量分析計 (Waters SpA、ミラノ、イタリア) で、正 (PI) および負 (NI) イオンモードの両方で実行されました。クロマトグラフィー実行中の質量補正は、ロイシン-エンケファリン溶液 (アセトニトリル/水中 50 ng/mL、0.1% ギ酸を含む 50:50 (v/v)) をロック質量として使用し、LockSpray™ システム (Waters) を通して注入することによって実行されました。 ) 15 秒間隔で。実験は解像度モード (20000 FWHM) で実行されました。動作パラメータは次のとおりです: キャピラリ電圧、ESI+ および ESI- でそれぞれ 0.80 および 0.50 kV。コーン電圧、50 V。ソース温度、150 °C; ソースオフセット80V; 脱溶媒和温度、600 °C。コーンガス、50 L/h; 脱溶媒和ガス、1000 L/h; ネブライザー圧力 6.5 bar。スペクトルは、低エネルギープロファイルの場合は衝突エネルギーとして 5 V を印加し、高エネルギープロファイルの場合は 25 から 45 V までの衝突エネルギーランプを使用することにより、データ独立型 MSE 取得モードで動作して取得されました。

UHPLC-HRMS データは、MassLynx (v4.2) ソフトウェア (Waters) を使用して *.raw ファイルに記録されました。

データ分析は、生データを Progenesis QI ソフトウェア (Waters、Milford、MA、USA) で処理することによって実行されました。このソフトウェアを使用すると、データの視覚化分析、2D マップの作成、クロマトグラムとスペクトルの分析が可能になります。このプログラムは、信号の自動調整、ピークピーキング、デコンボリューション、および正規化を提供します54,55。次の付加物が考慮されました: [M+H]+、[M+Na]+、[M+K]+、[M+NH4]+、[M+H2O+H]+、[M−H2O+H] +、[M+2H]2+、[M+2Na]2+、[M+2Na−H]+、[2M+H]+、[2M+Na]+、[M+H+Na]2+ PI および [M−H]−、[M+H2O−H]−、[M−H2O−H]−、[M+HCOO]−、[2M−H]−、[M+Na−2H] −、NI の [M+K−2H]−。

データは、メソッドブランクと比較して、最大グループ内変動を 10%、検出力分析値 > 0.8、および最小変化倍数 3 に設定してフィルタリングされました。

PCA は、データセットを調査し、アレッサンドロファルネーゼ公爵とマリアダヴィス公爵に属するサンプルを区別できる特徴を取得するために実行されました。化合物の同定は、質量誤差許容値 5 を使用して、さまざまな ChemSpider オンラインライブラリ (HMDB、FooDB、大腸菌メタボロームデータベース、酵母メタボロームデータベース、LipidMAPS、NPAtlas、KEGG データベース) に保存されているスペクトルと比較することによって実行されました。プリカーサーイオンの場合は ppm、フラグメントイオンの場合は 10 ppm。

LIPID MAPS® グリセロリン脂質の略語 (PC、PE など) は、ここでは特定された分析物を指すために使用されます。

現在の研究中に使用および分析されたデータセットは、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。

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リファレンスをダウンロードする

この実験的研究に使用された Progenesis QI ソフトウェアの費用は、大学研究省 (2021 年 6 月 25 日の政令第 737 号) によって支援され、パルマ大学によって「科学機器アップグレードプログラム」を通じて共同資金提供されました。 2022年」。この研究は、イタリア教育大学研究省の「優秀部門」プログラム (MIUR、2018 ～ 2022 年) によって資金提供された COMP-HUB イニシアチブの設備と枠組みの恩恵を受けました。

化学、生命科学、環境持続可能性学部、パルマ大学、パルコエリア Delle Scienze 17/A、43124、パルマ、イタリア

ニコロ・リボンニ、フェデリカ・ビアンキ、モニカ・マタロッツィ、マリア・カレリ

パルマ大学歯学部医学・外科、Via Gramsci 14、43126、パルマ、イタリア

マリアンナ・ペラキア & マルコ・メレティ

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概念化: FB、NR、M.Ma. 調査: NR、FB、M.Ma.、MP、M.Me. 方法論: NR、FB、M.Ma.、MC; 執筆 - 原案: NR、FB。執筆 - レビューおよび編集: NR、FB、M.Ma.、MP、M.Me.、MC

ニコロ・リボンニまたはフェデリカ・ビアンキへの通信。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

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転載と許可

リボンニ、N.、ビアンキ、F.、マタロッツィ、M. 他 Duke Alessandro Farnese と Maria D'Aviz による歯石のメタボローム分析のための超高速液体クロマトグラフィー高分解能質量分析法。 Sci Rep 13、8967 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s41598-023-36177-2

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受信日: 2022 年 12 月 18 日

受理日: 2023 年 5 月 30 日

公開日: 2023 年 6 月 2 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-36177-2

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